6217920127005821680780415Revista Mexicana de Ingeniería QuímicaVol. 11C, NOoN.T2E(N2I0D1O2) 259-267PRODUCCION DE PEPTIDOS FIJADORES DE CALCIO Y HIERRO PORLactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712CA2L13CDIeUrivMatioAnNanDdaIpRplOicaNtionBoIfNthDeISNtefGan-PMEaxPwTelIl DeqEuaStioPnsRODUCTION BY Lactococcus lactis (Desarrollo y aplicación de las ecsuuabcisopne. scdreeSmteofarni-sMNaxCwFelBl) 712C. Figueroa-Hernández1*, A. Cruz-Guerrero1, G. Rodríguez-Serrano1, L. GOmez-Ruiz1, M. García-Garibay1,2y J. Jimenez-Guzman11 Departamento de BiotecnoOogícr Universidad Autónoma Metropolitana, Iztapalapa., Av. San Rafael Atlixco No.186 Col. Vicentina, México D.F. 09340, México.2Dep5rtamento de Cienbias de la Alimentación, Divistón de Ciencias Biotógicas y de la Salud, UniversidadAutonoma Metropolitana, Unidad Lsrma. Av. Hidalgo Poniente 46, Colonia La Estacion, CP 52006, Lerma deVillada, Edo. de Mexico, Mexico.Recibido 28 de Mayo 2012; Aceptado 5 de Julio 2012Resumen S.A. Mediea-Moreeo, S. Huerta-Ochoa, C.A. Lucho-Coestaetieo, L. Aíuilera-Vázquez, A. Jiméeez-LactococcusGloaectziáslesz yu nMa.b Gacutteiréirareqzu-eRporjaese nta un alto potencial de generacioín de peíptidos bioactivos. Una de las actividadesmas importantes que ejercen los peptidos bioactivos es la fijación de minerales como el calcio, hierro y zinc. El objetivo de estetrabajo fue evaluar el efecto del pH en la produccioín de peíptidos fijadores de calcio y hierro en fermentaciones con Lactococcuslactis subsp. cremoris NCFB 712. Se obtervo que en la fermentaciln con control de pH se favorecio la produccion de peptidos fijadores de calcio (0.28 mmoles de Ca2+ mg-1 de proteína), con respectf a la fermentacion sin control de pH (0.23 mmoles de Ca2+ mg-1 de proteína). Existe una correlacion entre la actividad proteolítica y el calcio fijado por los sobrenadantes de las fermentacionEelspjceoonlya,sin control de pH. En cuanto a la actividad fijadora de hierro se observoí un aumento en la fermentacioín con control de pH ton respecto a la fermentacion sin control, en la cual se mantuvo la acfividad fijadora inicial propia de las proteínas de la leche. Se encontroí que los pesos moleculares de algunos de los peíptidos generados coinciden con los pesos moleculares de secuencias rtept ioeritacdraistcfoVmtolffitjta®dozriatsldite cNaltcAio y hierro.Palabras cl(aOvtet:impieízpttriidóocsibeitotsaícettiivrotss,iLlacftiotcmoiccctutsr ilóacctiitst,chóileirrrtosfiijSafdioi,hcfa.locaiorifiejsa,dioe..evjsjfe ic ttieicrit si Abstract zitlitt Vtlftt® zitliti NtA)LactococcusGl.a,Icetiesj-iSs hajzbuakcftwerfia, ,Hw.i,tlh. ,aVehlifgshipoo-eteendti.aáleo, ,fGb. ,iFoa. ,cGtiuvtejép.e.epzti-dLeóperoz ,dfuecdti,oHn..,HOe .neeáoefdtehze-Smáeo istheimz ,portant activities of these pe,ptides is metal chelating activity especially of calcium, iron and zinc. The aim of this work was evaluated the effect of pH on calcium and iron chelating peptides production in fermentations by Lactoccocus lactis subsp. cremoris NCFB 712. It was observed that during fermentation with pH control, the production of calcium binding peptides (0.28 mmol Ca2+ mg-1 protein) was improved, with respect to leriTieiCalion without pH control (0.23 mmol Ca2+ mg-1 protein). There is a correlacion between proteolytic aicetitvistyiraienidóccalcium-binding activity by the supernatants of fermentations with or without pH control. As for the iron-binding activity was observed an increase in the fermentation with pH control with respect to fermentation without control, which was maintained as the initial binding activity characteristic of the milk proteins. It was found that the molecular weights of some of tJh.eRp.,eMpteidjeesfg,,eRn.eLr.a,tReodamea.toc,hr,wGi.tlh.,tPheé.seezquence reported molecular weights and calcium and iron binding. Keywor,ds: bioactive peptides, Lactococcus lactis, iron-binding, calcium-binding.* Autora para la correspondencia. E-mail: claudiafigueroa26@gmail.com Tel. +(52, 55) 5804-4720; Fax: +(52 55) 5804-4712665353012700259259Publicado por la Academia Mexicana de Investigacion y Docencia en Ingeniería Química A.C.IntroducciónLa deficiencia en la ingesta de algunos minerales como el calcio, hierro y zinc es un problema de salud a nivel mundial. Se ha visto que deficiencias en la ingesta de hierro pueden afectar a la mitad de la poblacioín mundial, presentaíndose en un 35% en los niños y en un 42% en las mujeres. La deficiencia en la ingesta de hierro provoca problemas en el funcionamiento del sistema inmune (Bougleí y Bouhallab, 2006), mientras que la deficiencia en la ingesta de calcio puede provocar el desarrollo de osteoporosis. La osteoporosis afecta al 20% de las mujeres postmenopaíusicas en EE.UU y a 7.8 millones a nivel mundial (Heaney, 2000). Es por ello que se buscan alternativas que permitan aumentar la fijacioín de minerales en el cuerpo. Una de las alternativas son los peíptidos fijadores de minerales. Los peíptidos fijadores de minerales o caseinofosfopeíptidos (CPP) tienen la habilidad de aumentar la absorcioín del calcio y otros minerales divalentes como el hierro, el zinc y el magnesio ya que tienen la capacidad de formar complejos solubles con eístos. La actividad bioloígica de estos peíptidos se debe a que contienen en su estructura tres serinas fosfatadas (SerP) formando la estructura anioínica SerP-SerP-SerP-Glu-Glu (Kitts, 2006). La alta concentracioín de cargas negativas de los CPP en especial, la de los grupos fosfatos fijados a los residuos de serina, son los sitios potenciales para la unioín de los minerales. Se ha visto que la mayoría de los peptidos fijadores de minerales son generados a partir de las caseínas pero tambieín pueden ser producidos a partir de algunas proteínas del suero como la jS-lactoglobulina y la a-lactoalbumina (Vegarud y col., 2000). Estos peptidos se encuentran encriptados en la proteínas de la leche y deben ser liberados para ser bioactivos (Vasiljevic y Shah, 2008), siendo la fermentacioín de la leche con bacterias acido tácticas proteolíticas y algunas bacterias probioí ticas, uno de los meítodos para la obtencion de secuencias peptídicas bioactivas (Figueroa-Gonzaílez, 2010; Gonzaílez-Olivares, 2011). Se han encontrado una gran cantidad de peíptidos bioactivos en quesos y leches fermentadas, ya que durante la elaboracioín de estos productos, las bacterias aícido laícticas utilizadas como cultivos iniciadores, degradan las proteínas de la leche, debido a que cuentan con un sistema proteolítico. Este sistema consta de tres componentes principales: la proteinasa ligada a pared celular (CEP o PrtP), sistemas de transporte de oligopeíptidos y aminoaícidos y una gran cantidad de peptidasas, la gran mayoría de ellas, situadas intracelularmente (Hayes y col., 2007).Dos de los geíneros bacterianos maís utilizadospara la generacioín de peíptidos bioactivos durante el proceso de fermentacioín de la leche son Lactobacillus helveticus y Lactococcus lactis. Eí ste uíltimo es utilizado en la produccioín de diversos quesos y leches fermentadas. La mayoría de los trabajos de produccioín de peíptidos bioactivos, a partir del sistema proteolítico de las bacterias acido tácticas, se enfocan a la produccioín de peíptidos antihipertensivos y existen pocos trabajos que estudian la generacioín de peíptidos que presentan otro tipo de actividad, como la actividad fijadora de minerales. Por lo que el objetivo de este trabajo fue evaluar la produccioín de peíptidos fijadores de calcio y hierro a partir de la fermentacioín con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712, bajo diferentes condiciones de pH. Se realizoí la fermentacioí n bajo dos condiciones de pH, una en la que se dejoí evolucionar libremente el pH (fermentacioín sin control de pH) y otra manteniendo el pH a 6.2, valor reportado como oíptimo para la proteinasa de pared celular (Kunji y col., 1996).Materiales y métodosMicroorganismoSe empleoí la cepa Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712 (Coleccioín Nacional de Bacterias en Alimentos, Reino Unido), la cual fue conservada en medio litmus milk (DifcoTM, EUA) a 4°C. El inoículo fue crecido en leche descremada en polvo (Alpura, Meíxico) por 24 h a 30°C obteniendo una concentracioín final de 108 ufc/mL.FermentaciónSe evaluaron dos condiciones de fermentacioín en funcioín del pH: una manteniendo el pH a 6.2 (adicionando NaOH 10 N cada dos horas) y otra dejando que el pH disminuyera por efecto de los aícidos producidos por el microorganismo. La fermentacioín se llevoí a cabo en matraces Erlenmeyer de 1L con 600 mL de leche reconstituida al 20% (Figueroa-Hernaíndez, 2007). La leche se pasteurizoí a 121°C durante 5 minutos. El medio de fermentacioín fue inoculado al 5% (v/v). Las fermentaciones se llevaron a cabo a 30°C durante 28 h. Se tomaron muestras a las 0, 8, 16, 24 y 28 h. Se ajustoí el pH de cada muestra a 9 (para solubilizar la caseíína) y se centrifugaron a 25000xg por 30 min a 4°C (centríífuga Beckman J2-MI, EUA), los sobrenadantes obtenidos se almacenaron a -20°C para realizar los analisis posteriores. Las fermentaciones fueron realizadas por duplicado y los anaílisis de los sobrenadantes por triplicado.Determinación de calcio fijadoPara cuantificar la capacidad de fijacioín de calcio de los hidrolizados de las fermentaciones se empleoí la teícnica reportada por Brown y Rydvist (1981) con ligeras modificaciones. Se mezclaron 2 mL de cloruro de calcio 5 mM con 1 mL de la muestra diluida (1:10) con solucioín amortiguadora de fosfatos 0.05 M (pH 8). Se incuboí la mezcla durante 30 min con agitacioín de 100 rpm a 22°C. Posteriormente se tomoí una alícuota de 10 ¿L y se le adiciono 1 mL del reactivo de calcio arsenazo III (Diagnostic Chemical Limited, Canadaí), finalmente se midioí la absorbancia a 650 nm (espectrofotoímetro Shimadzu UV-160, Japoín) y se cuantificoí el calcio no fijado. El calcio total se determinoí tomando 10 ¿L de cloruro de calcio 5 mM y se le adicionoí 1 mL del reactivo de calcio arsenazo III. Se elaboroí una curva patroín de calcio (0-100¿g mL-1). El calcio fijado se determinoí con la ecuacioín 1.Calcio Fijado = C0 - C1(1)donde:C0 = Concentracioín de calcio total C1 = Concentracioín de calcio no fijadoDeterminacion de hierro fijadoPara cuantificar la capacidad de fijacioín de hierro de los hidrolizados de las fermentaciones se usoí la metodología reportada por Hwang y col. (2001) con modificaciones menores: se tomoí 0.1 mL de muestra y se mezcloí con 0.6 mL de agua desionizada, se adicionen 0.1 mL de FeCl24H20 (0.2mM). Se incubo a temperatura ambiente por 30 s. Se adicionaron 0.2 mL de ferrozina 1 mM (Sigma-Aldrich, EUA). La mezcla de reaccioí n se agitoí y se dejo reposar por 10 minutos a temperatura ambiente. Se midioí la absorbancia a 562nm y se calculoí la concentracioín de hierro no fijado. Para la determinacioín de hierro total se preparoí un testigo con todos los reactivos utilizados con excepcioín de la muestra. El hierro fijado por los hidrolizados se determinoí con la ecuacioín 2.% Hierro fijado = [(C0 - C1)/C0]x100(2)donde:C0 = Concentracioín de hierro total C1 = Concentracioín de hierro no fijadoDeterminacion de protemaLa determinacioín de proteíína se realizoí por el meítodo de Lowry (1951) con algunas modificaciones. Se mezclaron 100 ¿L de la muestra con 100 ¿L de buffer de fosfatos (0.1M), se le adicionoí un 1ml de reactivo de Lowry, el cual fue previamente preparado con 49 mL de Na2CO3 al 2% en NaOH 0.1 M, 0.5 mL de CuSO4 al 1% y 0.5 mL de tartrato de sodio y potasio (NaKC4H4O6) al 1%. La solucioín fue incubada a temperatura ambiente durante 30 minutos. Posteriormente se le adicionaron 100 ¿L de reactivo de Folin (Hycel, Meíxico). La reaccioín nuevamente fue incubada durante 30 minutos a temperatura ambiente. Finalmente se leyoí la absorbancia a 595 nm. Se elaboroí una curva patroín de seroalbuímina bovina (0100 ¿g mL-1).Determinacion de actividadproteoliticaSe determinoí por el incremento de grupos amino libres (Adler, 1979). Se mezclaron 2 mL de buffer de fosfatos pH 8.2 con 250 ¿L de muestra, posteriormente la mezcla fue agitada vigorosamente y se le adicionaron 2 mL de la solucioín de aícido trinitrobencensulfoínico (TNBS) al 0.1% (Fluka, Buchs, Suiza). La mezcla de reaccioín fue agitada y se incuboí a una temperatura de 50°C durante 60 minutos. Los tubos de reaccioín se mantuvieron aislados de la luz. Para detener la reaccioín se adicionaron 4 mL de HCl 0.1N. Se leyoí la absorbancia a 340 nm. Se elaboroí una curva patroín utilizando una solucioín de glicina 3mM con 1% de SDS.Estimacioi n del peso molecular de los peiptidos generadosSe realizoí una cromatografíía de exclusioín molecular para estimar el peso molecular de los peíptidos generados durante las fermentaciones con un cromatografo (Lab Alliance, EUA) y un detector de arreglo de diodos UV-Visible (SpectraSystem UV6000 LP, EUA). La columna utilizada fue la BioSep SEC-S-2000 con un tamaño de 300 x 7.80 mm (Phenomenex®, EUA). Se utilizo un buffer de fosfatos (0.1M, pH 6.8) como fase moívil. El flujo de trabajo utilizado fue de 0.9 mL min-1.Análisis estadísticoSe realizaron pruebas de anaílisis de varianza (a=0.05) con el programa estadístico NCSS 2000 (Hintze, 2001) para determinar si existíían diferencias significativas en el porcentaje de hierro fijado y la concentracioín de calcio fijado durante las fermentaciones. Se estimoí la correlacioín existente entre la actividad proteolíítica y la concentracioín de calcio fijado o el porcentaje de hierro fijado por los peíptidos producidos durante las fermentaciones con el programa Office Excel 2007 (Microsoft, EUA).Resultados y discusiónProduccioín de peíptidos fijadores de calcioSe llevaron a cabo fermentaciones con dos diferentes condiciones de pH con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712, a una de ellas se le controloí el pH, al valor oíptimo de la proteinasa ligada a pared celular (pH = 6.2) (Kunji y col., 1996), mientras que el pH en la fermentacioín sin control varioí de 6.44 a 5.01 a las 28 h de fermentacioín (Fig. 1). Se evaluoí el grado de fijacioín de calcio de los sobrenadantes obtenidos de las fermentaciones, y se observoí un aumento en la concentracioín de calcio que puede ser fijado por las muestras de la fermentacioín con control de pH a partir de la octava hora de fermentacioín hasta las 24 h. Este mismo efecto se observoí en la fermentacioín sin control de pH pero en menor proporcioín. Esto se corroboroí al realizar el anaílisis estadíístico encontraíndose que la concentracioín de calcio fijado por los sobrenadantes de las fermentaciones es significativamente diferente a las 16, 24 y 28 h, siendo mayor la concentracioín de calcio fijado en la fermentacioín con control de pH. Las maíximas concentraciones de calcio fijado fueron de 0.28 mmoles de Ca2+ mg-1 de proteíína en la fermentacioín con control de pH y de 0.23 mmoles de Ca2+ mg-1 de proteíína para la fermentacioí n sin control de pH, ambos valores se alcanzaron a las 24 h de fermentacioín. Se ha visto que el grado de fijacioín de calcio al peíptido se encuentra muy relacionada con el grado de fosforilacioín de la caseíína de la que se obtuvo el peíptido, seleccioín de la enzima con la cual fueron obtenidos los fragmentos peptíídicos y de las condiciones en las que se llevan a cabo los estudios de interaccioín peíptido-mineral como: el pH, temperatura y fuerza ioí nica (Kitts, 2006).Fig. 1. Concentracioín de calcio fijado por los peíptidos generados durante las fermentaciones realizadas con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712 con y sin control del pH.En un trabajo realizado por Kim y Lim (2004) donde se estudioí el hidrolizado trííptico de proteíínas del suero de la leche, se encontroí que se producen peíptidos fijadores de calcio con pesos moleculares entre 3.4 y 1.4 kDa. Los peíptidos pueden fijar entre 0.1 a 2 mmoles de Ca2+ mg-1 de proteíína. Por lo que las concentraciones de calcio fijado encontradas en esta investigacioín con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712 se encuentran dentro del intervalo de valores reportado por dichos autores.Dimitrov (2009) realizoí un estudio para determinar la capacidad fijadora de calcio de sobrenadantes ultrafiltrados de leches fermentadas con cepas de bacterias laícticas, encontrando cepas que presentaban fracciones peptíídicas con mayor capacidad de fijacioín de calcio, entre las cepas que mostraron tener una mayor actividad se hallaban cepas de Lactobacillus helveticus, Lactococcus lactis y Lactobacillus casei; la maíxima concentracioín de calcio fijado por los sobrenadantes de Lactococcus lactis fue de 20.68 mmoles de Ca2+ mL-1. Se calcularon los valores de calcio fijado en las fermentaciones realizadas con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712, los cuales van de 3.36 a 23.8 mmoles de Ca2+ mL-1 en la fermentacioín con control de pH y de 3.70 a 15.52 mmoles de Ca2+ mL-1 para la fermentacioín sin control de pH. Se observoí que los valores maíximos obtenidos de calcio fijado por los sobrenadantes de las fermentaciones con control de pH son muy similares al obtenido por la cepa de Lactococcus lactis reportada por Dimitrov (2009).12000 ii050100150200250[Meq de grupos amino libres]Fig. 2. Correlación de la actividad proteolítica con la concentracioín de calcio fijado por los peíptidos generados durante la fermentacioín con control de pH rueraa3lizada con Lactococcus lactis subsp. cremoris NuraC3FB 712.Fig. 3. Correlacion de la actividad proteolítica con la concentracioín de calcio fijado por los peíptidos generados durante la fermentacioín sin control de pH realizada con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712.Se determinoí la correlacioín entre el calcio fijado y la actividad proteolítica, debido a que se ha reportado que puede existir una correlacioín entre la actividad proteolíítica y la actividad bioloígica de los peíptidos (Pihlanto y col., 2010). Se encontroí una correlacioín de 0.967 para la fermentacioín con control de pH (Fig. 2) y de 0.830 para la fermentacioín sin control de pH (Fig. 3). Esto nos indica que la produccioín de peíptidos fijadores de calcio estaí relacionada con la actividad proteolíítica de la proteinasa de pared celular de Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712.Producción de péptidos fijadores de hierroSe determino el grado de fijacion del hierro de los sobrenadantes de las fermentaciones realizadas con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712 (Fig. 4), y se observo que en las fermentaciones realizadas con control de pH se obtuvo un mayor porcentaje de hierro fijado que en las fermentaciones sin control de pH, lo cual se confirmo al realizar el analisis estadístico encontrándose que existen diferencias significativas entre ambas fermentaciones en la concentracion de hierro fijado a las 8, 16 y 28 h.En el inicio de la fermentacion se observo un alto porcentaje de hierro fijado (30%), debido a que la leche contiene proteínas que tienen la capacidad de ligar hierro, como la a-lactoalbumina, la S- lactoglobulina y la lactoferrina. Los porcentajes maíximos de hierro fijado en las fermentaciones con control de pH y sin control son 60 y 38 % respectivamente.Existen pocos trabajos acerca de la capacidad de fijacioín de hierro por peíptidos generados durante la fermentacioín o hidroílisis enzimaítica de las proteíínas de la leche. Farvin y col. (2010) demostraron que las fracciones peptíídicas del yogurt teníían la capacidad de fijar hierro (7.7%), sin embargo utilizaron otra teícnica para la determinacioín de hierro y la cantidad de proteíína de los sobrenadantes utilizados era menor al encontrado en las fermentaciones realizadas en esta investigacioín con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712.Liu y col. (2005) determinaron la capacidad fijadora de hierro de los sobrenadantes de las muestras obtenidas a diferentes tiempos durante la elaboracioín de keífir con leche de vaca y soya cuyo contenido proteico era 10 mg mL-1. En este estudio no se encontraron incrementos significativos en la actividad fijadora de hierro de las muestras de keífir cuando son comparadas con las muestras sin fermentar (26%). Aunque no se puede comparar la actividad fijadora de hierro obtenido por los sobrenadantes del keífir con los obtenidos por los sobrenadantes las fermentaciones de esta investigacioín con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712 si se observa claramente que las fermentaciones con control de pH presentan una mejor actividad fijadora de hierro, lo cual no se observa en las fermentaciones realizadas sin control de pH.Por otro lado, se encontroí que en este caso no existe correlacioín entre la actividad proteolíítica y el porcentaje de hierro fijado. Esto se debe a que la capacidad fijadora de las proteíínas presentes, observada desde el inicio de la fermentación, es mas alta que la de los peíptidos producidos (Fig. 4).Tiempo de fermentación (horas)Con control de pHSin control de pH-a- pHFig. 4. Porcentaje de hierro fijado por los peptidos generados durante las fermentaciones realizadas con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712 con y sin control de pH.Comparación de los peptidos encontrados con péptidos fijadores de minerales reportadosPor medio de la cromatografía de exclusion molecular se estimoí el peso molecular de los peíptidos generados durante las fermentaciones realizadas con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712. En la Fig. 5 se observa el cromatograma del sobrenadante obtenido a la 28 h en ambas fermentaciones, en donde se pudo observar que los perfiles peptíídicos de las fermentaciones realizadas mostraban diferencias sobre todo en la concentracioín de algunos de los peíptidos producidos durante la fermentacioín, aunque tambieín se observaron diferencias en los pesos moleculares de los peíptidos generados en ambas fermentaciones. Los pesos moleculares de los peíptidos producidos en las fermentaciones fueron comparados con peíptidos fijadores de minerales reportados, encontraíndose varias coincidencias (Tabla 1). En la Tabla 1 se hace una compilacioín de los reportes maís relevantes al respecto y como se puede observar dentro de los fragmentos peptíídicos de las fermentaciones realizadas con control de pH, se encuentran dos fragmentos fijadores de minerales muy comuínmente producidos por medio de la hidroílisis enzimaíticaconpepsinao tripsinaapartirde lacaseíína, que son las secuencias j8-CN(1-25) y as1-CN(59- 79). Estos fragmentos contienen en su secuencia el triplete anioínico SerP-SerP-SerP, que se reporta como responsable de la unioín de los minerales divalentes al peíptido (Kitts, 2006). Sin embargo se ha visto que existen otros sitios potenciales para la fijacioín de los minerales dentro de la estructura de los peíptidos, como los grupos carboxíílicos libres del aícido glutaímico y aspaírtico, pero su actividad es menor (Kitts, 2006).Se debe mencionar que tambieín existen secuencias peptíídicas que coinciden con peíptidos fijadores de minerales derivados de la proteíínas del suero, los cuales han sido estudiados en los últimos anos como fuentes de peíptidos fijadores de minerales ya que tambieín se ha visto que las proteíínas del suero de la leche presentan sitios en donde se puede fijarelcalcio, estos sitios se encuentran en la jS-lactoglobulina (8- LG) y la a-lactoalbumina (a-LA). En la a-LA existe un sitio que tiene una alta afinidad por el calcio, los aminoaícidos en donde se fija este mineral son la asparagina y la lisina (Kim y Lim, 2004).Fig. 5. Cromatogramas de exclusioín molecular de los sobrenadantes de las fermentaciones realizadas con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712 con y sin control de pH a las 28 horas, obtenidos a una longitud de onda de 215 nm.899795502920Control de pHPM experimental (kDa)PM reportado (kDa)SecuenciareportadaCapacidad de fijacioí n de minerales reportadaReferencia3.133.11j6-CN(1-25)-4P4 mol de Fe2+ mol-1 deMeisel y Fitzgerald, (2003);peíptido, 2 mol de Ca2+ ,Cross y col., (2005);Mg2+, Zn2+mol-1 de peíptidoVegarud y col., (2000);(4.64 ±0.77 mol de Ca2+Zidane y col., (2012)mol-1 de peíptido)2.792.71as1-CN(59-79)-6.84 ±0.45 mol Ca2+mol-1Cross y col. (2001);5Pde peíptidoAimutis, (2004); Cross ycol. (2005)2.052.07as1-CN(43-58)-Ca2+ y Fe2+Vegarud y col. (2000)2P1.061.01j6-CN(15-20)-4P6.2 mmoles de Ca2+mL-1Dimitrov (2009)0.710.67£-LG(78-83)0.4 mmoles deCa2+ mg-1 deKim y Lim (2004)proteína0.69as2-CN(29-Ca2+Aimutis (2004)34)-1PSin control de pHPM experimentalPM reportadoSecuenciaCapacidad de fijacioí n deReferencia(kDa)(kDa)reportadaminerales reportada2.022.07as1-CN(43-58)-Ca2+ y Fe2+Vegarud y col. (2000)2P1.061.01j6-CN(15-20)-4P6.2 mmoles de Ca2+ mL-1Dimitrov (2009)0.700.69j6-LG(78-83)0.4 mmoles deCa2+ mg-1 deKim y Lim (2004)proteína0.69as2-CN(29-Ca2+Aimutis ( 2004)34)-1PControl de pHPM experimental (kDa)PM reportado (kDa)SecuenciareportadaCapacidad de fijacioí n de minerales reportadaReferencia3.133.11j6-CN(1-25)-4P4 mol de Fe2+ mol-1 deMeisel y Fitzgerald, (2003);peíptido, 2 mol de Ca2+ ,Cross y col., (2005);Mg2+, Zn2+mol-1 de peíptidoVegarud y col., (2000);(4.64 ±0.77 mol de Ca2+Zidane y col., (2012)mol-1 de peíptido)2.792.71as1-CN(59-79)-6.84 ±0.45 mol Ca2+mol-1Cross y col. (2001);5Pde peíptidoAimutis, (2004); Cross ycol. (2005)2.052.07as1-CN(43-58)-Ca2+ y Fe2+Vegarud y col. (2000)2P1.061.01j6-CN(15-20)-4P6.2 mmoles de Ca2+mL-1Dimitrov (2009)0.710.67£-LG(78-83)0.4 mmoles deCa2+ mg-1 deKim y Lim (2004)proteína0.69as2-CN(29-Ca2+Aimutis (2004)34)-1PSin control de pHPM experimentalPM reportadoSecuenciaCapacidad de fijacioí n deReferencia(kDa)(kDa)reportadaminerales reportada2.022.07as1-CN(43-58)-Ca2+ y Fe2+Vegarud y col. (2000)2P1.061.01j6-CN(15-20)-4P6.2 mmoles de Ca2+ mL-1Dimitrov (2009)0.700.69j6-LG(78-83)0.4 mmoles deCa2+ mg-1 deKim y Lim (2004)proteína0.69as2-CN(29-Ca2+Aimutis ( 2004)34)-1P104584527305Tabla 1. Comparacion bibliográfica de los pesos moleculares de los peptidos generados durante las fermentaciones con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712 que coinciden con peíptidos acarreadores de calcio y hierro.Tabla 1. Comparacion bibliográfica de los pesos moleculares de los peptidos generados durante las fermentaciones con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712 que coinciden con peíptidos acarreadores de calcio y hierro.9759955147945LG: Lactoglobulina, CN: CaseínaLG: Lactoglobulina, CN: CaseínaConclusionesEn este trabajo se encontroí que durante la fermentacioín con Lactococcus lactis subsp cremoris NCFB 712 se generaron secuencias peptídicas que tienen la capacidad de fijar hierro y calcio. Con respecto a las fermentaciones efectuadas para evaluar la actividad fijadora de calcio se observoí que en los sobrenadantes de las fermentaciones con control de pH se produjo un incremento en esta actividad. Tambieín se determinoí que existe una correlacioín entre la actividad proteolítica y el calcio fijado encontrándose una mayor correlacioín con los sobrenadantes de las fermentaciones con control de pH. En cuanto a la actividad fijadora de hierro, se observoí que en las fermentaciones con control de pH se incrementoí la actividad con respecto a las fermentaciones realizadas sin control, en las que se mantuvo la actividad propia de la leche. Los pesos moleculares de algunos peíptidos producidos durante las fermentaciones con Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712 coincidieron con algunas secuencias fijadoras de calcio y hierro reportadas.ReferenciasAdler, J. (1979). Determination of the degree of hydrolysis of food protein hydrolysates by trinitrobenzenesulfonic acid. Journal of Agricultural and Food Chemistry 27, 12561261.Aimutis, W. (2004). Bioactive peptides of milk proteins with particular focus on anticariogenesis. Journal of Nutrition 134, 989995.Bougleí, D. y Bouhallab, S. (2006). Mineral-Binding proteins and peptides and bioavailability of trace elements. En: Nutraceutical Proteins and Peptides in Health and Disease. Y. Mine y F Shadihi, eds., Pp. 29-40 Taylor y Francis. 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y col./ Revista Mexicana de Ingeniería Química Vol. 11, No. 2 (2012) 259-267/9j/4AAQSkZJRgABAQEAlgCWAAD/2wBDABALDA4MChAODQ4SERATGCgaGBYWGDEjJR0oOjM9PDkz ODdASFxOQERXRTc4UG1RV19iZ2hnPk1xeXBkeFxlZ2P/2wBDARESEhgVGC8aGi9jQjhCY2NjY2Nj Y2NjY2NjY2NjY2NjY2NjY2NjY2NjY2NjY2NjY2NjY2NjY2NjY2NjY2NjY2P/wAARCADrANMDASIA AhEBAxEB/8QAHwAAAQUBAQEBAQEAAAAAAAAAAAECAwQFBgcICQoL/8QAtRAAAgEDAwIEAwUFBAQA AAF9AQIDAAQRBRIhMUEGE1FhByJxFDKBkaEII0KxwRVS0fAkM2JyggkKFhcYGRolJicoKSo0NTY3 ODk6Q0RFRkdISUpTVFVWV1hZWmNkZWZnaGlqc3R1dnd4eXqDhIWGh4iJipKTlJWWl5iZmqKjpKWm p6ipqrKztLW2t7i5usLDxMXGx8jJytLT1NXW19jZ2uHi4+Tl5ufo6erx8vP09fb3+Pn6/8QAHwEA AwEBAQEBAQEBAQAAAAAAAAECAwQFBgcICQoL/8QAtREAAgECBAQDBAcFBAQAAQJ3AAECAxEEBSEx BhJBUQdhcRMiMoEIFEKRobHBCSMzUvAVYnLRChYkNOEl8RcYGRomJygpKjU2Nzg5OkNERUZHSElK U1RVVldYWVpjZGVmZ2hpanN0dXZ3eHl6goOEhYaHiImKkpOUlZaXmJmaoqOkpaanqKmqsrO0tba3 uLm6wsPExcbHyMnK0tPU1dbX2Nna4uPk5ebn6Onq8vP09fb3+Pn6/9oADAMBAAIRAxEAPwDv6KMD 0FGB6CgAoowPQUYHoKACijA9BRgegoAKKMD0FGB6CgAoowPQUYHoKACijA9BRgegoAKKMD0FGB6C 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7sffYd/YVT1e1s52SS4Vd8XzFz0Vff19hVnTLq2urUNaNlF4IPUH3oAtgBRgDAFLRRQAUUUUAFFF FABRRRQAUUUUAFFFFABRRRQAUUUUAFFFFABRRRQAUUUUAFFFFABUU0vlqAo3Oxwq+pp0kixoWY8C o4Y2LGWUfO3b+6PSgBPssbwvHMBJ5n38j71NsbC30+HyrdMAnJJ6mq2u3N7a2W+yi3tnDHqVH0q7 aPNJaxvcRiOUrllBzg0CJqKKKBhRRRQAUUUUAFFFFABRRRQAUUUUAJkUZFGB6UYHpQAZFGRRgelG B6UAGRRkUYHpRgelABkUZFGB6UYHpQAZFGRRgelGB6UAGRSFgASSABS4HpVc/wCkyFR/qVPP+0fT 6UAEY89xK/CD/Vqf51YyKMD0owPSgA4oyKMD0owPSgAyKMijA9KMD0oAMijIowPSjA9KADIoyKMD 0owPSgAyKMijA9KMD0oAMijIowPSjA9KADIoowPSigBaKKKACiiigAooooAKKKKACkpahmkK4SPm Runt7mgBsrGV/JjJH99h/CPT61MiqihVAAAwAKbFEIk2jk9ST1J9akoAKKKKACiiigAooooAKKKK ACiiigAooooAKKKKACiiigAooooAKKKKACiiigAoopruqIWY4A6mgBs0oiTJBJPAA6k02GIrl3OZ G+8f6D2psKM7+dICD0VT/CP8asUAFFFFABRRRQAUUUUAFFFFABRRRQAUUUUAFFFFABRRRQAUUUUA JketGR60YoxQAZHrRketGKMUAGRUNxdwWqq08qoGbaMnqamxWfqmkW+piMyllZDwVPUdxQBoZGM5 FV1P2mQOf9Up+Uf3j6/T0poRXAt4hiGMBWx3/wBn/GrQUAYA4oAMj1oyPWjFGKADI9aMj1oxRigA yPWjI9aMUYoAMj1oyPWjFGKADI9aMj1oxRigAyPWjI9aMUYoAMj1oyPWjFGKADI9aMj1oxRigAyP 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Revista Mexicana de Ingeniería Química Figueroa-Hernández, C.; Cruz-Guerrero, A.; Rodríguez-Serrano, G.; Gómez-Ruiz, L.; García-Garibay, M.; Jiménez-Guzmán, J. vol. 11, núm. 2, 2012, pp. 259-267 Universidad Autónoma Metropolitana Unidad Iztapalapa Distrito Federal, MéxicoFigueroa-Hernández, C.;Cruz-Guerrero, A.;Rodríguez-Serrano, G.;Gómez-Ruiz, L.;García-Garibay, M.;Jiménez-Guzmán, J.UAML22018-06-06T18:10:00Z2018-06-06T18:10:00Z19453824965Microsoft Office Word020858falseTítulo1Redalyc.PRODUCCIÓN DE PÉPTIDOS FIJADORES DE CALCIO Y HIERRO POR Lactococcus lactis subsp. cremoris NCFB 712false29445falsefalse16.0000